我國(guó)擁有長(zhǎng)期使用中藥和中藥制劑的歷史，但由于缺乏科學(xué)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，中藥一直未能得以飛速發(fā)展。如今，對(duì)中藥的質(zhì)量控制僅局限于外觀檢查是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。隨著新技術(shù)的發(fā)展，研究人員發(fā)現(xiàn)某些中藥中有幾百種化合物，其濃度范圍很寬，而且由于產(chǎn)地和采摘時(shí)期不同，以及炮制和加工工藝不同，中草藥的成分也各不相同。因此，對(duì)中藥化合物的質(zhì)量控制極具挑戰(zhàn)性。由于特殊配方的中藥制劑通常是由多種中藥組成，因此只測(cè)定中藥制劑中一兩種成分進(jìn)行質(zhì)量控制已無法滿足要求。例如用于治療冠心病的中成藥芪參益氣滴丸，就包含黃芪、丹參、三七和降香4 種中藥。
本研究以芪參益氣滴丸為樣品，用高分離度快速液相色譜（RRLC）- 紫外-可見檢測(cè)器和質(zhì)譜聯(lián)用，建立中藥質(zhì)量控制的新方法。主要目標(biāo)是建立一種可靠的方法，能夠測(cè)定在加熱和混合過程中不變的潛在目標(biāo)化合物。
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
實(shí)驗(yàn)儀器
Agilent 1200 系列RRLC 系統(tǒng)包括：帶真空脫氣機(jī)的SL 型二元泵、SL 型高性能自動(dòng)進(jìn)樣器、配置微量流通池(2 μl體積，3mm 光程) 的SL 型柱溫箱和二極管陣列檢測(cè)器SL ；Agilent 6410 四極桿質(zhì)譜儀，配置ESI 離子源；Agilent 化學(xué)工作站B.02.01SR，用于數(shù)據(jù)采集和分析；Agilent ZORBAX XDB C18 RRHT色譜柱，3.0×50 mm, 1.8 μm 粒徑。
標(biāo)準(zhǔn)品
丹酚酸B、丹參酮I、丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參素、三七皂甙R1 和黃芪甲苷均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(NICPBP)，人參皂甙Rg1、人參皂甙Rb1、原兒茶醛、原兒茶酸、人參皂甙Re 和人參皂甙Rc 購(gòu)自Sigma-Aldrich公司（美國(guó)）。
溶劑
乙腈購(gòu)自Fisher 公司（美國(guó)），水由Milli-Q 純水系統(tǒng)制備。
樣品和樣品制備
芪參益氣滴丸、黃芪、丹參、三七的中間提取物，及降香精油，由中國(guó)TASLY 制藥公司提供。原藥材購(gòu)自當(dāng)?shù)刂兴幍辍５瓮琛⒅兴幪崛∥锖椭兴幵先苡?/span>70% 甲醇/ 水溶液中，超聲提取30 min，用0.22 μm 濾膜過濾。
RRLC 方法
流動(dòng)相A：0.1% 甲酸水；流動(dòng)相B：乙腈，含0.1% 甲酸；
梯度：0 mi n，10%B ；8 mi n，38%B ；12 min，100%B ；持續(xù)3 min，然后10%B ；
流速：1.0 ml/min（被動(dòng)分流器將進(jìn)入MS 的流速降至0.4 ml/min）；
柱溫：45℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：203 nm ；峰寬：0.5s ；狹縫寬度：4 nm ；光譜：190~400 nm，2 nm 步進(jìn)。
質(zhì)譜方法
掃描：80~1400（正/ 負(fù)）；碰撞誘導(dǎo)解離電壓：70（正/ 負(fù)）；干燥氣體：12 L/min ；霧化器壓力：50psi ；干燥氣溫度：50℃；毛細(xì)管電壓：3200 V（正/ 負(fù)）。
結(jié)果與討論
加工過程中這些化合物是否發(fā)生了變化。大多數(shù)研究者都用203 nm 進(jìn)行檢測(cè)，因?yàn)橹饕钚曰衔锸窃磉埃?03 nm 波長(zhǎng)下有弱吸收。但203 nm處的大峰可能與質(zhì)量控制無關(guān)，那些小峰可能對(duì)研究活性成分更重要。因此，需要另一種靈敏度更高的檢測(cè)器，提供這些成分的更多信息。用安捷倫方法轉(zhuǎn)換計(jì)算器（光盤發(fā)行號(hào)5989-5130EN）將常規(guī)液相色譜方法轉(zhuǎn)換成高分離度快速液相色譜方法。丹參三七黃芪和降香提取物的比較由圖1 可見，在203 nm 檢測(cè)波長(zhǎng)下丹參和三七的色譜圖與混合提取物有很大區(qū)別。混合和加熱后，某些峰消失了，同時(shí)出現(xiàn)了一些新的色譜峰。目標(biāo)化合物篩選是質(zhì)量控制的重要步驟，可以確定
不同檢測(cè)器和條件之間的比較圖2 顯示了紫外和MS 檢測(cè)的不同結(jié)果。在MS 的總離子色譜圖中有更多的峰，因?yàn)槟承┏煞肿贤馕蘸苋趸蛘邲]有吸收。用MS 檢測(cè)增加了另一維數(shù)據(jù)，并得到了這些不同化合物的結(jié)構(gòu)信息。負(fù)離子模式給出了這些峰更完整的信息，可以對(duì)質(zhì)量控制的目標(biāo)化合物進(jìn)行鑒定。
比較芪參益氣滴丸和不同提取物圖3 顯示了丹參、黃芪和降香提取物與芪參益氣滴丸（由這3 種提取物和其它填加劑制成）的色譜圖。標(biāo)記數(shù)字的峰就是對(duì)這一中藥制劑質(zhì)量控制篩選到的目標(biāo)化合物。根據(jù)UV 和MS 數(shù)據(jù)，研究不同的色譜峰，以確定這些化合物是否發(fā)生了改變，鑒別結(jié)果如表1 所示。
小結(jié)
本文介紹的RRLC 紫外和MS 檢測(cè)方法可根據(jù)UV 和MS 檢測(cè)器提供的信息跟蹤中藥中幾種成分的質(zhì)量，因此較目前藥典控制單一組分的質(zhì)控法更為可靠。由于中藥中的成分可能在炮制和加工過程中發(fā)生變化，因此對(duì)其的跟蹤非常重要。
