滅菌系統是控制微生物的關鍵環節，其中滅菌系統又是重中之重。本文以高壓蒸汽滅菌為例，對滅菌效果的驗證進行探討。在注射劑生產過程中，微生物一直是影響藥品質量的關鍵因素之一。空氣凈化系統和
1 材料與方法
1.1 儀器與材料
高壓蒸汽滅菌柜(SO092w，日本櫻花精機株式會社)，標準溫度探頭(Pt100，日本PKC公司)，溫度探頭(Pt100，美國Datatrace公司)，油浴(RC6CP，美國Lauda公司)。生物指示劑(美國3M公司)。
1.2 溫度探頭的篩選
分別在使用前后將溫度探頭與標準溫度探頭放入油浴中，設定油浴溫度為12111e。待油浴溫度恒定3min后，將溫度探頭從油浴中取出，用專用讀取儀將儲存在探頭內部的溫度讀出，檢測情況見表1。使用前后溫度探頭偏差漂移應<0.5e。由表1
可見，1號探頭的偏差漂移大于規定值，6號探頭出現故障，因此1號和6號探頭不能使用，2、3、4、5、7號探頭可以使用。 1.3 空載熱分布實驗將2、3、4、5、7號溫度探頭隨機均勻分布在高壓蒸汽滅菌柜內，重復運行3次滅菌程序，測定F0值F0值是通過溫度和時間由積分計算得到的數值F0>8示滅菌柜的性能達到要求。溫度探頭在滅菌柜的具體位置見圖1。
1.4 滿載熱分布實驗
將50ml、500ml、2000mlSHOTT瓶和滅菌服等裝入滅菌柜，并將5個溫度探頭隨機均勻分布在裝載物中運行3次滅菌程序，測定F0值。溫度探頭在裝載物中的具體位置見圖2。
1.5 微生物挑戰性實驗
按實際滅菌情況，將滅菌柜滿載。在最冷點放置2個生物指示劑(biologicalindicator，BI)，滅菌后將BI放入56e恒溫培養箱中培養48h，觀察顏色變化。紫色為陰性，陽性對照為黃色。
2 結果
空載熱分布實驗的F0值見表2，
在滅菌過程中滅菌柜的F0值均>8。空載時最冷點的位置見圖3，為上層中間左側區域。滿載熱分布實驗的F0值見表3?？梢钥闯觯現0值與空載熱分布實驗相比有所下降，但各點均>8。最冷點位于2000mlSHOTT瓶內，與位置無關。
微生物挑戰性實驗中，1、2號BI均呈紫色(陰性)，顯示滅菌效果符合要求。
3 討論
3.1 驗證產生背景
在以往的制藥過程中，往往通過檢驗產品是否無菌來判定滅菌效果。但在20世紀70年代，美國出現了幾起產品滅菌后又被污染導致患者死亡的案例[1]，這說明必須對整個滅菌過程加以控制。為此，中國藥典2000年版將滅菌法收入通則附錄，為將滅菌的定性控制納入定量控制創造了必要的條件。
3.2 驗證結果分析
在高壓蒸汽滅菌中，蒸汽是殺死細菌的介質，它滅菌的機制是使細菌中主要蛋白質及核酸變性。為了體現一定溫度下的滅菌效果，引入了熱致死時間F0[2]。 F0定義為與121e時滅菌等效的時間，通過F0值可以定量地判斷滅菌效果。F0值越大，滅菌效果越好。本實驗中空載與滿載狀態下高壓蒸汽柜內最冷點的確定是通過測定F0值得到的。空載時最冷點為蒸汽柜內上層中間左側區域，即蒸汽進口處的不銹鋼擋板區域，此擋板可以幫助蒸汽迅速充滿滅菌柜，但卻阻礙了蒸汽直接到達此位置，所以為最冷點。滿載時柜內的最冷點位于2000mlSHOTT瓶內，與位置無關。這是因為2000mlSHOTT瓶容積最大，熱穿透所需要的時間最長，所以升溫最慢，F0值最低。理想狀態下空載時應不存在熱分布的冷點，如有冷點應找出滅菌設備存在什么問題，是否需要加以改進。但最終的判斷標準應是滿載狀態下F0>8、微生物挑戰性試驗中BI為陰性。本實驗通過在蒸汽柜內最冷點處放置BI來考察柜內的滅菌效果，如果滿載時最冷點符合滅菌要求，即說明整個滅菌柜的滅菌效果符合要求。
3.3 驗證的意義
在進行高壓蒸汽滅菌時，應該有相應的書面資料支持，包括方案的制定，數據的記錄和分析，這就是驗證。它是一項既有相當的技術難度，又需要較大投入的工作。但是實施過程中，它可以避免由于滅菌不徹底而造成的不合格產品的產生，因此驗證所帶來的效益要遠大于增加的成本。嚴謹、可靠的驗證工作是產品質量的根本保證。
4 參考文獻
[1] FrederickJC，JamesPA.上海醫藥行業協會譯.無菌制劑工藝的驗證[M].第2版.上海：上?？茖W普及出版社，1998.1[2] PongiluppisGS.Microbiologicvalidationintheproductionofsterilepharmaceuticals[J].ChimPharm，1991，130(6)：2032212.
